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PCR的原理是什么

更新時(shí)間:2020-12-14    作者:admin    人氣:46

  PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。我們公司在東莞、香港都有g(shù)rs再生環(huán)保塑料pcr產(chǎn)品庫,歡迎咨詢。PCR由變性→退火→延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:


  ①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備。

  ②模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合。

  ③引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基互補(bǔ)配對與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。

  重復(fù)循環(huán)變性→退火→延伸三過程就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需2——4分鐘,2——3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍。

  PCR反應(yīng)條件為溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)。溫度與時(shí)間的設(shè)置:基于PCR原理三步驟而設(shè)置變性-退火-延伸三個(gè)溫度點(diǎn)。在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點(diǎn)法,雙鏈DNA在90——95℃變性,再迅速冷卻至40——60℃,引物退火并結(jié)合到靶序列上,然后快速升溫至70——75℃。

  在Taq DNA聚合酶的作用下,使引物鏈沿模板延伸。對于較短靶基因(長度為100——300bp時(shí))可采用二溫度點(diǎn)法,除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一,一般采用94℃變性,65℃左右退火與延伸(此溫度Taq DNA酶仍有較高的催化活性)。
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